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本试剂盒通过碱裂解法裂解细胞，新型的硅基质膜专一结合DNA，在特定条件下，有效去除内毒素、基因组DNA、RNA、蛋白质等杂质。每次可抽提1～6mL菌液，抽提获得的质粒量会受质粒拷贝数，细胞培养浓度等因素影响。由本试剂盒所得的质粒可直接用于细胞转染，DNA测序，PCR，基于PCR的突变，体外转录，转化细菌，内切酶消化等下游实验。

• 该试剂盒在室温条件下，可保存12个月，更长时间保存可置于4℃。若溶液产生沉淀，可在室温下放置一段时间，或在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。
  
• Buffer CBS用于质粒提取前柱子的平衡处理，可以活化硅胶膜，有利于提高质粒产量。
  
• Wash Solution在使用前应按要求加入48mL无水乙醇，使用后及时盖紧瓶盖，防止乙醇挥发。
  
• 独立包装的RNaseA收获后请于-20℃保存，溶液P1（Buffer P1)在使用前先加入RNase A（全部加入），混匀，4℃保存。
  
• 溶液P2（Buffer P2)低于室温会产生沉淀，使用前应检查是否出现浑浊，如有浑浊现象，50℃水浴加热溶解。溶液P2（Buffer P2)使用后请拧紧瓶盖。
  
• 溶液P2和P3对人体有刺激性，操作时请小心，不要直接接触。
  
• 提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。

• 第一次使用产品前，请仔细阅读该说明书
  
• 确认Buffer P1中已经加入了RNase A，并做好标记。
  
• 检查Washing Solution是否按照要求加入乙醇
  
• 检查Buffer P2中是否有沉淀，若有沉淀，50℃保温溶解，待恢复室温后使用。

• DNA吸附柱平衡处理：向质粒DNA吸附柱中加入200μL buffer CBS，12000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将质粒DNA吸附柱重新放回到收集管中备用。
  
  • 请使用当天处理过的质粒DNA吸附柱。
• 根据菌液生长情况，取2～4mL 2YT或LB培养基过夜培养的菌液，12000rpm离心1min，弃上清。
  
  • 4～6mL菌液分2到3次离心到一个2mL的离心管中。对于较低拷贝数的质粒，请用4～6mL菌液，并加倍BufferP1,P2和P3的用量，或分几个离心管中处理，最后通过多次离心将上清液收集到同一个吸附柱中。
• 加入250μL Buffer P1，用枪头或振荡器充分悬浮细菌。
  
  • 不要残留细小菌块，否则会影响裂解，导致提取质粒量低和质量下降，检查Buffer P1中是否已加入RNaseA。
• 加入250μL Buffer P2，立即温和并充分地上下翻转混合6～8次，使菌体充分裂解，直至形成透亮的蛋清状溶液，此步骤不宜超过5min，如果未能变得清亮，可能菌体过多，裂解不彻底，应减少菌液量。
  
• 加入350μL Buffer P3，温和并充分地上下翻转混合8～10次，室温放置2～5min，12000rpm离心10min。
  
• 将步骤5中的上清转移到质粒DNA吸附柱中（吸附柱放于收集管中），注意不要吸到沉淀。12000rpm离心1min，取出质粒DNA吸附柱，倒掉收集管中废液。
  
• 将吸附柱重新放回收集管中，加入500μL W1 Solution，12000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液。
  
• 将吸附柱重新放回收集管中，加入500μL Wash Solution，12000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液。
  
• 重复步骤8一次。
  
• 倒掉收集管中废液，12000rpm离心2min，彻底去除Wash Solution（此步骤不可省略）。然后开盖室温放置数分钟，以彻底晾干吸附柱中残留的漂洗液。
  
• 将质粒DNA吸附柱放入干净的1.5mL离心管中，在质粒DNA吸附柱膜中央加入50～100μL Elution Buffer，37℃放置2min，12000rpm离心2min，离心管中的液体即包含目的质粒的溶液。
  
• 取1～3μL（视质粒浓度定）进行琼脂糖凝胶电泳检测，纯化好的DNA可立即用于后续实验或-20℃保存。
  
  • 洗脱缓冲液体积不应少于50μL，体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若后续做测序，需使用ddH2O做洗脱液，并保证其pH值在7.0～8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。为了增加质粒的回收率，可将得到的溶液重新加入吸附柱中，再次离心收集。